COVID-19 Procedure di test e buone pratiche


Feb 10, 2021

COVID-19  Procedure di test e buone pratiche

Secondo il CDS  (Centers for Disease Control and Prevention), ci sono due tipi di test disponibili per COVID-19: test virale e test sierologico. Il test virale o molecolare determina se un paziente è attivamente infettato da SARS-CoV-2, i campioni vengono raccolti tramite tampone nasofaringeo. D'altra parte, il test sierologico o anticorpale, noto anche come test per infezione passata, rivela se un paziente è stato esposto al virus attraverso campioni di sangue. La maggior parte dei test implementati contro COVID-19 sono test virali basati sulla trascrizione inversa. I campioni raccolti dovrebbero idealmente essere collocati immediatamente in una provetta di trasporto sterile o su ghiaccio e su terreni speciali per prevenire la degradazione poiché il materiale genetico di SARS-CoV-2 è fragile e transitorio.

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Figura 1. Test virali (rilevamento degli acidi nucleici) Diagnosi di infezioni SARS-CoV-2 attive Fonte: American Society for Microbiology

 

Al contrario, il test degli anticorpi mira alla risposta immunitaria della persona infetta, rilevando gli anticorpi contro il virus invece di rilevare il materiale genetico virale. Sebbene questo test possa fornire il risultato entro un'ora, la maggior parte dei professionisti afferma che questo tipo di test non è accurato come il test virale. Il problema è che gli anticorpi si sviluppano solo diverse settimane dopo un'infezione, il che significa che un test basato sugli anticorpi non è raccomandato per la diagnosi precoce e potrebbe non notare casi asintomatici.

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Figure 2. Antibody Test (Serology) Detect Immune Response to SARS-CoV-2 Exposure Source: American Society for Microbiology

 

Di seguito sono descritti i componenti dei test virali per il protocollo CDC COVID-19 "Centers for Disease Control and Prevention (CDC) 2019-Novel Coronavirus (2019-nCoV) Real-Time Reverse Transcriptase (RT) -PCR Diagnostic Panel:

 

Reagenti e consumabili


I laboratori di test avranno bisogno delle seguenti forniture a seconda degli elementi del kit per il test del virus fornito dal CDC per eseguire il test COVID-19. Per garantire la totale conformità, assicurati che non ci siano componenti mancanti.

  • Set di primer / sonde rRT-PCR
  • Controllo positivo del modello
  • Master mix RT-qPCR
  • Acqua di grado molecolare, priva di nucleasi
  • Guanti monouso senza polvere
  • Puntali barriera agli aerosol P2 / P10, P200 e P1000
  • Provette per microcentrifuga da 1,5 mL sterili, prive di nucleasi
  • Strisce di provette di reazione per PCR da 0,2 mL o piastre di reazione per PCR in tempo reale da 96 pozzetti e strisce ottiche con 8 tappi
  • Pennarello da laboratorio
  • Rack di raffreddamento per provette da microcentrifuga da 1,5 e provette di reazione per PCR da 96 pozzetti da 0,2 mL
  • Rack per provette da microcentrifuga da 1,5 ml
  • Decontaminanti superficiali

Attrezzature


Oltre ai materiali di consumo, i laboratori devono anche creare un ambiente favorevole al monitoraggio e allo svolgimento del test virale. È probabile che i laboratori che conducono regolarmente reazioni a catena della polimerasi siano conformi alle condizioni ambientali. In caso contrario, le seguenti apparecchiature sono essenziali per un input di successo nel test del coronavirus.

  • Miscelatore vortex

    Mescola efficacemente piccoli volumi di liquidi.

  • Micropipette (2 o 10 μl, 200 μl e 1000 μl)

    Strumenti calibrati regolabili utilizzati con punte sterili monouso per trasferire piccole quantità di liquido.

  • Micropipette multicanale (5-50 μl)

    Strumenti calibrati regolabili utilizzati con punte sterili monouso per trasferire più campioni di piccole quantità di liquido alla volta.

  • Blocchi freddi: 2 blocchi freddi da 96 pozzetti

    Fissare le provette dei campioni e mantenere una temperatura fresca durante l'aggiunta di reagenti e campioni.

  • Sistema di rilevamento PCR in tempo reale

    Combina cicli PCR automatizzati regolabili con tecnologia di rilevamento ottico.

 

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Oltre all'elenco specificato di materiali di consumo e attrezzature richieste, CDC ha sottolineato che l'isolamento virale da campioni raccolti da persone sospettate di avere COVID-19 dovrebbe essere eseguito da personale addestrato nelle procedure tecniche e di sicurezza pertinenti nei laboratori BSL-2 e BSL-3 . In caso contrario, i laboratori clinici non dovrebbero tentare di condurre l'isolamento virale. L'Organizzazione mondiale della sanità (OMS) ha anche aggiunto che le linee guida nazionali sulla biosicurezza dei laboratori dovrebbero essere seguite in tutte le circostanze. In corrispondenza di ciò, l'OMS ha pubblicato le Linee guida di laboratorio sulla biosicurezza per la manipolazione e l'elaborazione di campioni associati a COVID-19 e ha discusso la seguente buona pratica e procedura microbiologica (GMPP) come requisito fondamentale nel lavoro di laboratorio diagnostico non propagativo (ad es. sequencing, NAAT). 

 

Buone pratiche

  • Non conservare cibo o bevande o oggetti personali come cappotti e borse in laboratorio.
  • All'interno del laboratorio è inoltre vietato mangiare, bere, fumare e / o applicare cosmetici.
  • Non mettere materiali come gomme da masticare e penne in bocca mentre si è all'interno del laboratorio.
  • Dopo aver maneggiato qualsiasi materiale biologico, lavarsi accuratamente le mani preferibilmente con acqua corrente calda e sapone prima di lasciare il laboratorio.
  • Non posizionare fiamme libere o fonti di calore vicino a forniture infiammabili e non lasciarlo incustodito.
  • La pelle rotta o eventuali tagli devono essere coperti prima di entrare nel laboratorio.
  • Le forniture di attrezzature di laboratorio e materiali di consumo, inclusi reagenti, DPI e disinfettanti, dovrebbero essere sufficienti e appropriate per le attività eseguite prima dell'ingresso in laboratorio.
  • Per ridurre la possibilità di incidenti e incidenti come versamenti, inciampi o cadute per il personale di laboratorio, le scorte devono essere conservate in modo appropriato (secondo le istruzioni di conservazione) e in modo sicuro.
  • È necessario seguire una corretta etichettatura di tutti gli agenti biologici, sostanze chimiche e materiali radioattivi. Barriere come i rivestimenti in plastica dovrebbero essere utilizzate per proteggere i documenti scritti, in particolare quelli che potrebbero dover essere rimossi dal laboratorio.
  • Il lavoro deve essere eseguito con cura, in modo tempestivo e senza fretta.
  • Evita di lavorare quando sei stanco.
  • Eliminare i materiali non necessari per la procedura di lavoro e mantenere l'area di lavoro pulita e in ordine.
  • Vietare l'uso di auricolari in quanto potrebbero distrarre il personale e impedire l'ascolto degli allarmi delle apparecchiature o della struttura.
  • Coprire o rimuovere qualsiasi gioiello che possa lacerare il materiale dei guanti, facilmente contaminarsi o agire da catalizzatore per l'infezione.
  • Se indossati regolarmente, è necessario prendere in considerazione la pulizia e la decontaminazione di occhiali o gioielli.
  • Evitare di utilizzare dispositivi elettronici mobili, soprattutto quando non sono necessari per i lavori o le procedure di laboratorio specifici da eseguire.
  • Tenere i dispositivi elettronici mobili in aree in cui non potrebbero essere facilmente contaminati o agire da catalizzatore per l'infezione.
  • Utilizzare barriere fisiche o decontaminare i dispositivi prima di lasciare il laboratorio se la vicinanza di tali dispositivi ad agenti biologici è inevitabile.

Procedure tecniche

  • Quando si manipolano i campioni, utilizzare buone tecniche per ridurre al minimo la formazione di aerosol ed evitare l'inalazione di agenti biologici.
  • Evitare l'ingestione di agenti biologici e il contatto con la pelle e gli occhi.
  • Quando si maneggiano i campioni, non dimenticare di indossare sempre guanti monouso.
  • Evitare il contatto delle mani guantate con il viso.
  • Durante il funzionamento, proteggere o schermare la bocca, gli occhi e il viso dove possono verificarsi schizzi.
  • Per evitare lesioni e l'iniezione di agenti biologici, maneggiare con cura tutti gli oggetti taglienti e gli aghi.
  • Se possibile, sostituisci gli oggetti in vetro con quelli in plastica.
  • Usa forbici con estremità smussate o arrotondate rispetto a quelle con estremità appuntite.
  • Ridurre al minimo il rischio associato all'uso di siringhe o aghi e utilizzare apri fiale per la manipolazione sicura delle fiale.
  • Non tappare, agganciare o rimuovere mai gli aghi dalle siringhe monouso.
  • Per lo smaltimento di qualsiasi materiale appuntito come aghi, aghi combinati con siringhe, lame e vetri rotti, devono essere utilizzati contenitori a prova di perforazione o resistenti alla perforazione dotati di coperchi sigillati.

Prevenire la dispersione di agenti batterici

  • Per lo smaltimento di campioni e colture devono essere utilizzati contenitori a prova di perdite con coperchi adeguatamente fissati prima dello smaltimento in contenitori per rifiuti dedicati.
  • Considerare l'apertura delle provette con una garza o un tampone imbevuti di disinfettante.
  • Al termine delle procedure di lavoro e se del materiale viene versato o contaminato, decontaminare le superfici di lavoro con un disinfettante adatto.
  • Per un'efficace inattivazione completa, il disinfettante deve essere efficace contro il patogeno che viene manipolato e deve essere lasciato a contatto con materiali di scarto infettivi per un tempo sufficiente.

Quando queste pratiche vengono applicate rigorosamente e vengono utilizzate le giuste attrezzature di laboratorio, la probabilità di esposizione del personale durante la manipolazione o la manipolazione di agenti biologici sarà ridotta al minimo.

 

 Referenze:

[1] Coronavirus Disease 2019 (COVID-19). May 2020.
https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-ncov/index.html
[2] Laboratory Biosafety Guidance Related to The Coronavirus Disease (COVID-19). February 2020.
https://www.who.int/docs/defaultsource/coronaviruse/laboratory-biosafety-novel-coronavirus-version-1-1.pdf?sfvrsn=912a9847_2
[3] American Society for Microbiology. April 2020.
https://asm.org/Articles/2020/April/COVID-19-Testing-FAQs